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HUV-EC-C(人脐静脉血管内皮细胞)美森细胞最新引进!

1984年,HUVEC细胞株由Hiroyoshi Hoshi、Wallace L.Mckeehan从一段长约10-20cm的人正常脐带静脉中获取、建立。

2018年,Setsuko Shioda等人发现HUVEC细胞株(passage 31)在贴壁汇合时细胞与细胞之间存在间隙,这与典型的内皮细胞特征有所不同。

图片来源:Hoshi and McKeehan, 1984



图片来源:Setsuko Shioda et al., 2018

SetsukoShioda等人研究发现,HUVEC细胞株18-30代的倍增时间为23.5个小时,24-27代的倍增时间为67个小时,27-30代的倍增时间为84个小时,32-34代的倍增时间为100个小时。培养至40代后,细胞形态出现多样化,有些细胞变大或变小,有些细胞出现多核;细胞密度下降、倍增时间延长。最后细胞在第54代停止生长,ATCC的预期寿命也显示在50-60代。

更重要的发现是,HUVEC的HHV-6(Human herpes virus 6)病毒检测呈阳性,HHV-6基因组整合到了HUVEC的9号染色体长臂的远端。不过整合区域位于亚端粒,HHV-6基因组只有一个拷贝数,因此对HUVEC细胞增殖及端粒功能未产生影响。

图片来源:Setsuko Shioda et al., 2018

HUV-EC-C细胞可用于血管内皮修复损伤的研究

使用范围:本产品仅限于科学研究,决不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。

该细胞系培养所用基本培养基为F-12K Medium,配置完全培养基时需加10%FBS, 0.1 mg/mL heparin + 0.3 mg/mL Endothelial Cell Growth Supplement (ECGS).

拆包&存储:

1. 请立即检查包装袋是否有破损或漏液

2. 请立即将细胞培养瓶从包装盒中取出,并按照下方操作步骤进行培养传代注意:如为冻存管,请收到后立即解冻培养

对于贴壁培养的细胞,寄送前,我们会将培养基充满整个培 养瓶,以减少产品运输过程中贴壁细胞的脱落。

培养瓶中细胞操作步骤:

1. 收到细胞产品后,请注意观察是否有污染。将培养瓶置于倒置 显微镜下仔细检查是否浑浊、是否细菌污染。因在运输过程 中存在颠簸,且有些细胞对温度变化也很敏感,可能存在一些 细胞脱落漂浮的情况,这些细胞仍是活细胞,请勿丢弃,可离 心富集后传代使用。

2. 对于贴壁培养的细胞,在生物安全柜环境中,用真空泵去除 培养瓶中的多余培养基,至剩余5-8mL左右,随后将细胞置于 含有5% CO 的37℃恒温 培养箱中培养。如果细胞已经长满培养 瓶,请立即传代。

3. 对于悬浮培养的细胞,在生物安全柜环境中,转移培养瓶中 的细胞至离心管中,离心200×g / 5 - 10 min,去除上清后,用5 mL 培养基吹散细胞,转移至新的培养瓶中,随后置于含有5% CO₂ 的37℃恒温培养箱中培养。

冻存细胞操作步骤:

注意:为保存细胞的高存活率,请收到产品后,立即解冻培养。1.将冻存管置于37℃ 水浴中来回晃动,迅速解冻。为避免污染,确保冻存管口置于水面之上。解冻需迅速,大约2分钟。2. 一旦冻存管中液体融化后,立即取出,采用 70%酒精喷拭冻存管表面。从此步开始,后续操作须在生物安全柜中完成。3.将冻存管中的液体转移到含有5mL完全培养基的离心管中,离心200Xg/5-10min,用真空泵去除含有冻存液的上清。

4. 用完全培养基重新悬浮细胞并转移到新的培养瓶中。为保证细胞复苏的存活率,请将培养基在37℃水浴预热后使用。

5.将细胞置于含有5%CO₂的37℃恒温培养箱中培养。

贴壁细胞传代培养:

1. 吸取并弃掉培养瓶中培养基。

2. 加入 1.0 mL 0.25(w/v)Trypsin-0.53mM EDTA溶液,并置于37℃培养箱中孵育,直至细胞从壁上脱落分离。此过程大约需要3至5分钟(此处为12.5 cm2培养瓶所用体积,可根据实际情况增减用量)。

3. 加入2mL完全培养基中和胰蛋白酶,并轻轻吹打将细胞从培养瓶表面吹落,并使细胞分散。

4.离心200Xg/5min,去除上清后,取适量的培养基将细胞重悬,取适量悬液置于新的培养瓶中,并加入新鲜细胞完全培养基至总 体积为4mL。

5. 将细胞置于含有5%CO₂的37℃恒温培养箱中培养。

传代比例:建议 1:2 至 1:4

培养基换液每隔 2 至 3 天。

细胞冻存液,请使用产品: Cryo Frozen Medium (Cat#CTCC-002-002)

离心收集细胞后,加入适量冻存液(每管细胞冻存量达到10的6次方),将冻存管放入冻存盒置于负80冰箱,24h后将冻存管转入液氮长期保存

参考文献:

PubMed= 6333682 ; DOI= 10.1073/pnas.81.20.6413
Hoshi H., McKeehan WL
Brain- and liver cell-derived factors are required for growth of human endothelial cells in serum-free culture.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6413-6417(1984)

PubMed= 28755030 ; DOI= 10.1007/s10616-017-0119-y
Shioda S., Kasai F., Ozawa M., Hirayama N., Satoh M., Kameoka Y., Watanabe K., Shimizu N., Tang H. -M., Mori Y., Kohara A.
The human vascular endothelial cell line HUV-EC-C harbors the integrated HHV-6B genome which remains stable in long term culture.
Cytotechnology 70:141-152(2018)

PubMed= 29892436 ; DOI= 10.1098/rsos.172472
Shioda S., Kasai F., Watanabe K., Kawakami K., Ohtani A., Iemura M., Ozawa M., Arakawa A., Hirayama N., Kawaguchi E. , Tano T., Miyata S., Satoh M., Shimizu N., Kohara A.
Screening for 15 pathogenic viruses in human cell lines registered at the JCRB Cell Bank: characterization of in vitro human cells by viral infection.
R. Soc. Open Sci. 5:172472-172472(2018)



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浙江美森细胞科技有限公司:通过供应各类通用细胞株、报告基因细胞株、原代细胞制品、细胞培养周边产品以及以各类微生物制品为代表的生物资源为研究人员提供服务;针对客户的个性化需求,定制/改造细胞制品。

服务项目:稳定表达工具细胞株、诱导表达工具细胞株、单细胞分辨率示踪细胞株、耐药株、稳转株、慢病毒包装基因敲除(敲入)

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