HUV-EC-C（人脐静脉血管内皮细胞）美森细胞最新引进！

（图片来源：Hoshi and McKeehan, 1984）

（图片来源：Setsuko Shioda et al., 2018）

SetsukoShioda等人研究发现，HUVEC细胞株18-30代的倍增时间为23.5个小时，24-27代的倍增时间为67个小时，27-30代的倍增时间为84个小时，32-34代的倍增时间为100个小时。培养至40代后，细胞形态出现多样化，有些细胞变大或变小，有些细胞出现多核；细胞密度下降、倍增时间延长。最后细胞在第54代停止生长，ATCC的预期寿命也显示在50-60代。

更重要的发现是，HUVEC的HHV-6（Human herpes virus 6）病毒检测呈阳性，HHV-6基因组整合到了HUVEC的9号染色体长臂的远端。不过整合区域位于亚端粒，HHV-6基因组只有一个拷贝数，因此对HUVEC细胞增殖及端粒功能未产生影响。

（图片来源：Setsuko Shioda et al., 2018）

使用范围：本产品仅限于科学研究，决不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。

该细胞系培养所用基本培养基为F-12K Medium,配置完全培养基时需加入10%FBS, 0.1 mg/mL heparin + 0.3 mg/mL Endothelial Cell Growth Supplement (ECGS).

拆包＆存储：

1. 请立即检查包装袋是否有破损或漏液

2. 请立即将细胞培养瓶从包装盒中取出，并按照下方操作步骤进行培养传代注意：如为冻存管，请收到后立即解冻培养

对于贴壁培养的细胞，寄送前，我们会将培养基充满整个培 养瓶，以减少产品运输过程中贴壁细胞的脱落。

培养瓶中细胞操作步骤：

1. 收到细胞产品后，请注意观察是否有污染。将培养瓶置于倒置 显微镜下仔细检查是否浑浊、是否细菌污染。因在运输过程 中存在颠簸，且有些细胞对温度变化也很敏感，可能存在一些 细胞脱落漂浮的情况，这些细胞仍是活细胞，请勿丢弃，可离 心富集后传代使用。

2. 对于贴壁培养的细胞，在生物安全柜环境中，用真空泵去除 培养瓶中的多余培养基，至剩余5-8mL左右，随后将细胞置于 含有5% CO 的37℃恒温 培养箱中培养。如果细胞已经长满培养 瓶，请立即传代。

3. 对于悬浮培养的细胞，在生物安全柜环境中，转移培养瓶中 的细胞至离心管中，离心200×g / 5 - 10 min，去除上清后，用5 mL 培养基吹散细胞，转移至新的培养瓶中，随后置于含有5% CO₂ 的37℃恒温培养箱中培养。

冻存细胞操作步骤：

注意：为保存细胞的高存活率，请收到产品后，立即解冻培养。1.将冻存管置于37℃ 水浴中来回晃动，迅速解冻。为避免污染，确保冻存管口置于水面之上。解冻需迅速，大约2分钟。2. 一旦冻存管中液体融化后，立即取出，采用 70%酒精喷拭冻存管表面。从此步开始，后续操作须在生物安全柜中完成。3.将冻存管中的液体转移到含有5mL完全培养基的离心管中，离心200Xg/5-10min，用真空泵去除含有冻存液的上清。

4. 用完全培养基重新悬浮细胞并转移到新的培养瓶中。为保证细胞复苏的存活率，请将培养基在37℃水浴预热后使用。

5.将细胞置于含有5%CO₂的37℃恒温培养箱中培养。

贴壁细胞传代培养：

1. 吸取并弃掉培养瓶中培养基。

2. 加入 1.0 mL 0.25（w/v）Trypsin-0.53mM EDTA溶液，并置于37℃培养箱中孵育，直至细胞从壁上脱落分离。此过程大约需要3至5分钟（此处为12.5 cm2培养瓶所用体积，可根据实际情况增减用量）。

3. 加入2mL完全培养基中和胰蛋白酶，并轻轻吹打将细胞从培养瓶表面吹落，并使细胞分散。

4.离心200Xg/5min，去除上清后，取适量的培养基将细胞重悬，取适量悬液置于新的培养瓶中，并加入新鲜细胞完全培养基至总 体积为4mL。

5. 将细胞置于含有5%CO₂的37℃恒温培养箱中培养。

传代比例：建议 1:2 至 1:4

培养基换液: 每隔 2 至 3 天。

细胞冻存液，请使用产品： Cryo Frozen Medium (Cat#CTCC-002-002)

离心收集细胞后，加入适量冻存液（每管细胞冻存量达到10的6次方），将冻存管放入冻存盒置于负80冰箱，24h后将冻存管转入液氮长期保存。

参考文献：

PubMed= 6333682 ; DOI= 10.1073/pnas.81.20.6413
Hoshi H., McKeehan WL
Brain- and liver cell-derived factors are required for growth of human endothelial cells in serum-free culture.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6413-6417(1984)

PubMed= 28755030 ; DOI= 10.1007/s10616-017-0119-y
Shioda S., Kasai F., Ozawa M., Hirayama N., Satoh M., Kameoka Y., Watanabe K., Shimizu N., Tang H. -M., Mori Y., Kohara A.
The human vascular endothelial cell line HUV-EC-C harbors the integrated HHV-6B genome which remains stable in long term culture.
Cytotechnology 70:141-152(2018)

PubMed= 29892436 ; DOI= 10.1098/rsos.172472
Shioda S., Kasai F., Watanabe K., Kawakami K., Ohtani A., Iemura M., Ozawa M., Arakawa A., Hirayama N., Kawaguchi E. , Tano T., Miyata S., Satoh M., Shimizu N., Kohara A.
Screening for 15 pathogenic viruses in human cell lines registered at the JCRB Cell Bank: characterization of in vitro human cells by viral infection.
R. Soc. Open Sci. 5:172472-172472(2018)